みにれびゅう

Sigma-1受容体の生理機能と筋萎縮性側索硬化症との関連

福永 浩司・篠田 康晴

東北大学大学院薬学研究科薬理学分野 ◇ 〒980–8578　宮城県仙台市青葉区荒巻字青葉6–3

1. はじめに

Sigma-1受容体（Sig-1R）は（＋）-SKF-10,047と呼ばれる化合物の標的分子として同定され1），一部のオピオイドや覚せい剤の結合分子でもあることからオピオイド受容体の一つと考えられていた．しかし，一般的な麻薬拮抗薬であるナロキソンで阻害されないことから，薬理学的特性によりオーファン受容体に分類されるユニークなタンパク質である2）．1990年代後半より，ヒトをはじめとした哺乳動物のSig-1R遺伝子が同定・クローニングされた3–5）．近年の研究により，Sig-1Rがシャペロンタンパク質としてさまざまなタンパク質に結合し，その機能や発現を調節することが明らかとなってきた．一方で，オピオイドのみならずプロゲステロンなどの性ホルモン，一部の抗うつ薬や抗精神病薬などがSig-1Rに結合すること，ミトコンドリアのカルシウム濃度調節に関わるIP₃R（inositol 1,4,5-trisphosphate receptor）などのタンパク質を安定化するシャペロン活性を示すことから，その生理・薬理的機能が注目されている．さらに，アルツハイマー病や統合失調症などの中枢疾患と相関を示すSig-1Rの遺伝子多型が存在すること，筋萎縮性側索硬化症（amyotrophic lateral sclerosis：ALS）のある家系においてSig-1Rの遺伝子変異が報告されたことから，これらの疾患におけるSig-1Rの病理学的役割が注目されている．本稿では，Sig-1Rの持つシャペロンタンパク質としての機能やALSとの関連について紹介する．

2. Sig-1Rのシャペロンタンパク質としての機能

Sig-1Rは223アミノ酸からなる2回膜貫通型タンパク質であり，全身で発現している（図1A）3, 5, 6）．細胞内では小胞体膜に局在するが，小胞体の中でもとりわけミトコンドリアに接するMAM（mitochondria-associated ER membrane）に豊富に存在している6）．MAMは小胞体とミトコンドリアの近接した領域で，mitofusin 1/mitofusin 2複合体やVAPB（vesicle-associated membrane protein-associated protein B）-PTPIP51（protein tyrosine phosphatase-interacting protein 51）複合体などが局在している7, 8）．MAMにおいてSig-1RはIP₃R, BiP（binding immunoglobulin protein）, IRE1（inositol-requiring enzyme 1）, Rac1（Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1）-GTPase, VDAC2（voltage-dependent anion channel 2）などの機能分子に結合し，これら分子に対しシャペロン活性を示す9）．BiP自身もシャペロン分子として機能するが，生理的条件下ではSig-1RはBiPと会合している．細胞内Ca2＋が低下したり，細胞をコカイン，（＋）ペンタゾシンなどSig-1Rアゴニストで刺激したりすると，Sig-1RはBiPと解離して，IP₃Rなど他の分子のシャペロン機能を発現する9）．IRE1は小胞体ストレスセンサーとして機能することが知られているが，Sig-1RはIRE1に結合しシャペロン活性を介しIRE1を安定化し，下流のXBP1（X-box binding protein 1）の転写を促進し，小胞体ストレスから細胞障害へのプロセスを抑制する10）．Sig-1RはRac1-GTPase活性を介して神経突起伸張やスパイン形成に関与するRac1に対してもシャペロン活性を示す．さらに，Sig-1Rの刺激はRac1を介して細胞に適度な酸化ストレスを誘導することで細胞死に対して抑制的に働くことが示された11）．Sig-1Rアゴニストは種々の神経芽腫細胞において，神経突起伸張を促進する．これらの神経突起伸張作用にもRac1-GTPase活性が関与すると考えられる．VDACはミトコンドリア外膜に存在し，ミトコンドリアCa2＋輸送を担うと考えられているが，Marriottらは12），Sig-1RとVDAC2が共役して，ミトコンドリアへのコレステロール輸送を促進することを示した．このようにMAMにおいてSig-1Rは，小胞体–ミトコンドリア間のCa2＋輸送やエネルギー産生，脂質輸送など多彩な生理機能を調節していると考えられている6, 9–12）．

図1 Sig-1RおよびSig-1SRの構造およびIP₃受容体機能調節

ところで我々はC末端領域のシャペロンドメインを欠くSig-1RのスプライシングバリアントSig-1R short isoform（Sig-1SR）を見いだした（図1）13）．このSig-1SRはシャペロンドメインを欠くためIP₃Rと相互作用できないと考えられる．他のMAMや形質膜における分子に対しても同様に結合せず，したがって，シャペロン活性を示さないと考えられる．Sig-1RはMAMにおいてIP₃Rと複合体を形成して，ミトコンドリアへのCa2＋輸送を促進する．一方，シャペロンドメインを欠くSig-1SRはマウス終脳に広く発現するが，その生理機能は不明であった．Sig-1SRを神経芽細胞腫Neuro2a細胞に過剰発現させると，Sig-1R同様に長く伸びた伸展型ミトコンドリアの割合が増加し，小胞体–ミトコンドリア接合部の面積も上昇する（図2）13）．したがって，Sig-1SRもSig-1Rと同様にMAMに存在し何らかの機能を持つと考えられた．CHO細胞では，Sig-1RがMAMにおいてIP₃Rタイプ3（IP₃受容体の一つの型）と複合体を形成し，IP₃Rを活性化することによりミトコンドリアへのCa2＋輸送に促進的に作用すること14），Sig-1R活性化剤がこの作用を増強することが示されている6）．そこで我々はNeuro2a細胞にSig-1RとSig-1SRを過剰発現させて，ATP受容体刺激によるミトコンドリアへのCa2＋流入を測定したところ，コントロール細胞に比べてSig-1R発現細胞ではCa2＋流入量が上昇し，Sig-1SR発現細胞では逆に低下した（図3）．また，ATP産生量に関してもSig-1RとSig-1SRの違いが観察された．無刺激のSig-1R発現細胞，Sig-1SR発現細胞はともにATP産生量が上昇する．ところが，ツニカマイシン処理により小胞体ストレスを誘導するとSig-1SR発現細胞ではSig-1R発現細胞と比較して顕著にATP産生量が低下した．その結果，Sig-1SR発現では神経細胞死が増悪していることがわかった（図3）13）．Sig-1SRは中枢神経系に発現が認められるが，脳虚血侵襲など神経細胞死が見られる状況でも発現変動は観察されていない．Sig-1SRの病態での役割は不明であるが，小胞体ストレスのない状況ではSig-1SRを強制発現するとATP産生を亢進させる（図3B）．実際に，Neuro2a細胞に発現させると，Sig-1Rと同様に神経突起伸展作用がみられることからも，非ストレス下ではSig-1SR過剰発現は細胞を障害せず，ATP産生を介し，何らかの機能を発揮しているものと考えられる13）．

図2 Neuro2a細胞の小胞体およびミトコンドリア形態に対するSig-1R発現およびSig-1SR発現の影響

図3 Sig-1RおよびSig-1SRの発現がミトコンドリアへのCa2＋輸送に与える影響の検討

3. 筋萎縮性側索硬化症に関連した遺伝子変異がSig-1Rの機能に与える影響

2011年，サウジアラビアの若年性筋萎縮性側索硬化症（ALS）患者の家系において，Sig-1Rをコードする遺伝子，SIGMAR1遺伝子に点突然変異が同定された15）．この変異により，102番目のアミノ酸残基がグルタミン酸からグルタミン（E102Q）へと置換される（図1）．また，Sig-1Rの結晶構造解析から，この102番目のグルタミン酸は2回目の膜貫通領域とC末端シャペロンドメインの間に位置することや，近接する36番目のバリンや37番目のフェニルアラニンと水素結合を形成することがわかっている16）．同報告では，E102Q変異によりこれらの水素結合が失われ，Sig-1Rの構造安定性が失われる可能性が示された．

我々はさらに，ALSに関連したこのE102Q変異がSig-1Rの機能にどのように影響するのか検討した17）．まず，Sig-1RE102Q変異体は野生型と異なりIP₃Rと結合性を示さず，また，野生型と異なり細胞内に凝集体を形成することがわかった17）．そこで，IP₃Rを介したミトコンドリアへのCa2＋輸送を図3で示した同様のイメージング法により検討した（図4A, B）．その結果，野生型Sig-1Rの発現はミトコンドリアへのCa2＋輸送を増加させた一方，Sig-1RE102Qの発現はCa2＋輸送を低下させた．ミトコンドリア内のCa2＋はクエン酸回路のいくつかの反応に関わる酵素活性に必要であり18），クエン酸回路の下流の電子伝達系やエネルギー（ATP）産生に重要である．そこで，細胞のATP含量について検討したところ，Sig-1RE102Qの発現はATP含量を有意に低下させることが明らかとなった17）．Sig-1RE102QはIP₃Rと解離する結果，ミトコンドリアへのカルシウム供給が低下し，ATP産生が低下したと考えられる．一方，凝集体を形成するメカニズムは不明である．

図4 Sig-1RE102Q変異体の発現がミトコンドリアへのCa2＋輸送やプロテアソーム活性に与える影響

ATPは細胞内エネルギーとしてタンパク質の酵素活性や翻訳後修飾，さらには細胞内輸送等，細胞内の多彩な反応に必須である．我々はATP低下で障害されるユビキチン–プロテアソーム経路に着目した．この経路は，ALSを含むさまざまな神経変性疾患の病理学的特徴である細胞内の異常な凝集体（封入体）形成に関わる19, 20）．Sig-1RE102Q変異体を発現させると，ATP濃度低下に伴って，プロテアソーム活性が有意に低下した（図4C）．ミトコンドリア内膜でのCa2＋取り込みを担うミトコンドリアカルシウム単一輸送体（MCU）の阻害薬であるRu360で処置すると，同様にプロテアソーム活性が低下した（図4C）．逆に細胞膜透過性が高く，クエン酸回路の基質であるメチルピルビン酸（MP）処置は，Sig-1RE102Q発現細胞において，ATP産生を改善して，プロテアソーム活性の低下を抑制した（図4C）．さらに，ALS病態で亢進することが知られている小胞体ストレスをツニカマイシン処置により誘導した結果，非発現細胞のプロテアソーム活性は有意に低下し，Sig-1RE102Q発現細胞では活性低下がさらに顕著であった（図4C）．以上の結果から，Sig-1RE102Qの発現は，ミトコンドリアへのCa2＋輸送を低下させ，ATP産生の低下とそれに起因するプロテアソーム活性の低下を引き起こすことが明らかとなった．

次に，RNAのスプライシングやmRNAの安定性などを調節するDNA結合する機能を有し，ALS患者において多くの遺伝子変異が見いだされている21, 22）．TDP-43タンパク質の細胞内局在を検討した．TDP-43は正常な状態では主に核内に局在する一方で，ほぼすべてのALS患者の脊髄運動神経細胞において細胞質に異常なTDP-43の凝集体がみられることが報告されている23）．その結果，野生型Sig-1Rで得られた結果とは異なり，Sig-1RE102Q変異体をNeuro2A細胞に発現させると内在性TDP-43が核から細胞質への漏出を引き起こすことが明らかになった（図5）．細胞質におけるTDP-43のクリアランスには，ユビキチン–プロテアソーム系とオートファジー系が関与しているため24），Sig-1RE102Q変異体の発現は，ATP産生の低下に起因するユビキチン–プロテアソーム系の活性低下を介し，TDP-43が細胞質に蓄積するものと考えられる．以上の結果を図6にまとめた．Sig-1RE102Qは，凝集体を形成しIP₃Rと解離することで，ミトコンドリアへのCa2＋輸送障害を引き起こす．これにより，ミトコンドリアでのATP産生やプロテアソーム活性の低下が引き起こされ，TDP-43の細胞質への漏出が生じることで細胞毒性が引き起こされると考えられる．今後は，変異を導入したSig-1Rのノックインマウスなどを樹立して，Sig-1RE102Qにより引き起こされるALS発症のメカニズムをより詳細に解析する必要がある．

図5 Sig-1RE102Q発現によるTDP-43の核外漏出

図6 Sig-1RE102Qが神経細胞障害を引き起こすメカニズム

4. おわりに

ALSは，いったん発症すると劇的に症状が進行する疾患の一つで，現在根本的な治療薬は存在しない．昨年，これまで脳梗塞の治療薬として用いられてきたエダラボンが，適用を広げALS患者への処方についても認可された．エダラボンは活性酸素を取り除く薬剤で，ALSの代表的な病態メカニズムとして知られる酸化ストレスの亢進に対して有効であることが期待される．また，Sig-1R自体もALSの創薬ターゲットとして着目されており，ALSモデルマウスやモデル細胞においてSig-1Rアゴニストは病態を改善することが報告されている25–27）．今後，神経変性疾患においてSig-1Rを標的にした治療薬が期待できる．

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福永 浩司（ふくなが こうじ）

東北大学大学院薬学研究科教授．医学博士．

略歴 ◇ 1955年鹿児島県に生る．80年熊本大学大学院薬学研究科修了．85年医学博士取得．88年米国バンダービルト大学ハワード・ヒューズ研究所博士研究員．90年熊本大学医学部講師．93年同助教授．2002年より現職．放送大学，浙江大学，蘇州大学客員教授．

研究テーマと抱負 ◇ 専門は神経薬理学で，アルツハイマー病・レビー小体病などの神経変性疾患の治療薬開発，精神遅滞・自閉症などの児童精神疾患のシナプス病態を研究しています．脳可塑性をターゲットにした創薬が目標です．

ウェブサイト ◇ http://www.pharm.tohoku.ac.jp/~yakuri/yakuri_top.html

趣味 ◇ キャンプ，秘湯巡り．